RIPA Lysis

 RIPA lysis

Materials

RIPA buffer: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1% NP-40, 0.25% Na-deoxycholate, 100 mM NaCl, 1 mM EDTA, protease inhibitor

Procedure

1. Cell harvest (scraping or trypsin-EDTA) and centrifuge at 3000 rpm for 5 min at 4^oC.

2. Cell washing once with 1 ml PBS and centrifuge again. 

3. Add RIPA lysis buffer (200-300 μl for 6 well scales) and incubate in ice for 30 min 

(rocking or vortex every 10 min).

4. Centrifuge at 13000 rpm for 30 min at 4^oC. 

5. Take supernatant and use it for further analysis.